这是一份关于“真菌荧光染色液试剂”在临床检测中操作规范的详细说明，旨在确保检测的快速和精准两大核心优势得以实现。

真菌荧光染色液试剂临床操作规范

一、 核心优势与原理

•   快速： 与传统培养法（需3-7天）相比，可在10-20分钟内完成染色镜检，实现快速初诊。

•   真菌荧光染色液试剂精准： 荧光染料（如Calcofluor White）可特异性与真菌细胞壁中的几丁质和纤维素结合，在荧光显微镜下产生鲜明的荧光，显著提高阳性检出率，尤其适用于形态不典型、数量少的真菌。

•   原理： 荧光染料与真菌细胞壁特异结合，在特定波长（如紫外光或蓝光）的激发下发出可见荧光，使真菌在暗背景下清晰可辨。

二、 真菌荧光染色液试剂操作规范（以常见步骤为例）

目标： 规范样本处理、染色、镜检全过程，确保结果准确可靠。

第一步：样本采集与处理（精准的基础）

1.  真菌荧光染色液样本类型：

    ◦   无菌体液： 痰液、肺泡灌洗液、脓液、组织块、脑脊液、尿液等。

2.  采集要求：

    ◦   痰液： 指导患者深咳，留取肺部深部痰。优先选择脓性、粘稠部分。

    ◦   肺泡灌洗液： 无菌收集后立即送检。

    ◦   组织块： 无菌采集，若为较大组织，需用无菌剪刀剪碎或研磨。

3.  真菌荧光染色液前处理（关键步骤）：

    ◦   痰液/脓液： 加入等体积的消化液（如4% NaOH溶液），充分振荡混匀15-20分钟，液化样本，消化背景杂蛋白和黏液，释放真菌。液化是否充分直接影响染色效果。

    ◦   清亮体液（脑脊液、胸腹水）： 可离心浓缩后取沉淀涂片。

第二步：涂片制备

1.  取适量处理后的样本，在载玻片上制备薄而均匀的涂片。

2.  自然风干或37℃温箱烘干，避免高温烘烤，以免破坏真菌结构。

第三步：荧光染色（快速、精准的核心）

1.  滴加染色液： 在已干燥的涂片标本上，完全覆盖真菌荧光染色液A液，静置染色1-2分钟。

2.  覆盖盖玻片： 取一张盖玻片，直接盖在染色区域，或滴加一滴封片剂后再覆盖盖玻片。

3.  避免气泡： 轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡。

第四步：真菌荧光染色液镜检与结果判读（精准的最终体现）

1.  显微镜设置：

    ◦   使用荧光显微镜。

    ◦   启用紫外光（UV）或蓝光（BV） 激发滤片。

    ◦   在暗室环境下进行观察。

2.  真菌荧光染色液试剂结果判读：

    ◦   阳性： 在暗背景中，真菌（如念珠菌、隐球菌、丝状真菌的菌丝和孢子）呈现出鲜明的亮蓝色、黄绿色或银白色荧光，形态清晰可辨。

    ◦   阴性： 仅见样本自身组织或细胞，无特异性荧光。

    ◦   注意事项：

        ▪   某些纤维（如植物纤维、动物毛髮）可能产生微弱荧光，需根据形态学特征（如菌丝的分隔、分枝角度，孢子的出芽情况）进行精准鉴别。

        ▪   注意观察荧光强度及真菌结构完整性。

三、 真菌荧光染色液试剂质量控制与注意事项

为确保“快速、精准”的可持续性，必须严格执行以下质量控制措施：

1.  对照设置：

    ◦   阳性对照： 每次新开瓶试剂或每周应使用已知阳性的样本进行质控，确保染色液和显微镜系统工作正常。

    ◦   阴性对照： 使用已知阴性样本，确保无非特异性荧光干扰。

2.  试剂管理：

    ◦   试剂应避光、2-8℃冷藏保存。

    ◦   检查试剂有效期，禁止使用过期试剂。

    ◦   注意A、B液（若有）的配套使用。

3.  显微镜维护：

    ◦   定期校准荧光显微镜，确保汞灯在有效使用寿命内，光路对齐，荧光强度充足。

4.  人员培训：

    ◦   操作人员必须经过专业培训，能准确识别各种真菌的荧光形态，并能与杂质进行鉴别。

5.  生物安全：

    ◦   所有操作应在生物安全柜内进行，操作人员佩戴个人防护装备，防止实验室感染。废弃染液和玻片需按医疗废物处理规定进行消毒处理。

真菌荧光染色液试剂通过其特异性的荧光标记，实现了临床真菌检测的快速诊断和高灵敏度检测。然而，其“精准”性高度依赖于规范化的操作流程——从合格的样本采集、彻底的消化前处理、准确的染色时间，到标准的镜检判读和严格的质量控制。

真菌荧光染色液试剂唯有将“快速”的试剂与“精准”的操作规范相结合，才能为临床提供最可靠的真菌感染早期诊断依据，指导医生及时、准确地用药。